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更新時間:2024-11-05
兔下頜骨成纖維細胞
商品屬性:
組織來源 | 產品規格 | 細胞形態 | 貨號 |
下頜骨 | 5×105cells/T25細胞培養瓶 | 成纖維細胞樣 | YS-01X8449 |
細胞簡介:
兔下頜骨成纖維分離自下頜骨組織;下頜骨位于面下部,呈弓形,圍成口腔的前壁和側壁,是面部能活動的骨骼;其水平部分為下頜體,其垂直部分為下頜支,表層為骨密質,內部為骨松質,與顳骨關節凹組成顳下頜關節。下頜體分內、外兩面及上、下兩緣。下頜支分兩面、四緣及兩突。下頜支與顳骨形成關節。該關節非常靈活,可做出包括咀嚼動作在內的多種動作下頜骨的骨小梁也順應咀嚼肌的拉力和力傳送的方向而排列,斜向上后排列成線形;下頜骨的骨質較致密,血供較差,除主要接受下齒槽動脈血供外,又接受來自骨表面黏骨膜動脈分支的血液。成纖維細胞(Fibroblast)是疏松結締組織的主要細胞成分,由胚胎時期的間充質細胞分化而來。成纖維細胞較大,輪廓清楚,多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構,其細胞核呈規則的卵圓形,核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛,細胞質嗜弱堿性,具明顯的蛋白質合成和分泌活動,在一定條件下,它可以實現跟纖維細胞的互相轉化;成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的成纖維細胞呈圓形、折光性良好,懸浮于培養基中。30min細胞貼壁,其中部分開始伸出偽足,表現為小的突起;6h后細胞基本貼壁,伸展成梭形,胞核清晰,分布較均勻,散在生長,不聚集成團;細胞生長迅速,5-7天即呈融合狀態,細胞排列緊密,有的交叉重疊生長,平坦、胞體較大,細胞質透明,細胞核較大,呈橢圓形,顏色淡。細胞融合,并彼此連接成網狀;細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。
原代細胞的培養條件:
一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養)培養
1、細胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;
2、細胞接種時濃度要稍大一些,至少為5×108細胞/L;
3、培養基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養;
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應在37℃5% CO2的培養箱中培養;
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細胞發生脫落,漂浮;
7、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網狀,應將原代細胞換液;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經靜置培養1周時,應將細胞懸液經低速離心后換液。
二、懸浮細胞培養
1、原代培養時要盡量去除紅細胞;
2、短期培養,可在含10%小牛血清的RPMI1640培養基中進行;
3、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內,進行分瓶試驗;
4、長期培養時,淋巴細胞中要加入生長因子,白血病細胞中要加入少量的原患者血清,以利細胞生長;
5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時才能進行。
方法簡介:
實驗室分離的兔下頜骨成纖維采用-膠原酶混合酶消化后差速貼壁制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測:
實驗室分離的兔下頜骨成纖維經Vimentin免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養信息:
培養基:含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細胞形態:成纖維細胞樣
傳代特性:可傳5代左右;3代以內狀態佳
消化液:0.25%
培養條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
兔下頜骨成纖維體外培養周期有限;建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養,以此保證該細胞的佳培養狀態。
細胞傳代及凍存:
細胞傳代步驟 | 細胞凍存步驟 |
如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。 | 待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細胞凍存時,棄去培養基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細胞變圓脫落后,加入2ml培養基終止消化,可使用血球計數板計數。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細胞的培養方法一般有以下4種:
① 組織塊培養法
組織塊培養是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養瓶(或皿)中,瓶壁可預先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。
② 消化培養法
③ 懸浮細胞培養法
對于懸浮生長的細胞,如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化,可采用低速離心分離,直接培養,或經淋巴細胞分層液分離后接種培養。
④器官培養
器官培養是指從供體取得器官或組織塊后,不進行組織分離而直接在體外的特定環境條件下培養,器官培養可保持器官組織的相對完整性,可用于重點觀察細胞間的聯系、排列情況和相互影響,以及局部環境的生物調節作用。
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