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更新時間：2024-11-05

人臍帶血造血干細胞

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細胞簡介：

人臍帶血造血干分離自臍帶血；臍帶血是胎兒娩出、臍帶結扎并離斷后殘留在胎盤和臍帶中的血液。近十幾年的研究發現，臍帶血中含有可以重建造血和免疫系統的造血干細胞，可用于造血干細胞移植，因此，臍帶血已成為造血干細胞的重要來源。臍帶血中含有大量的干細胞，干細胞是生命的種子，它會分化成機體的各種細胞，結出各種不同的果實——血液細胞、神經細胞、骨骼細胞等。干細胞是具有自我更新、高度增殖和多項分化潛能的細胞群體；這些細胞可以通過分裂維持自身細胞的特性和數量，又可進一步分化為各種組織細胞，從而在組織修復等方面發揮積極作用。造血干細胞具有自我更新能力并能分化為各種血細胞的前提細胞，終生成各種血細胞成分，包括紅細胞，白細胞和血小板。造血干細胞需要根據機體的生理需求適時的補充血液系統各個成熟細胞組分。同時在損傷、炎癥等應激狀態下，造血干細胞也扮演著調節和維持體內血液系統各個細胞組分的生理平衡的角色。臨床治療中，造血干細胞移植廣泛應用于血液系統疾病以及自身免疫疾病，在其它實體瘤的治療中，比如淋巴瘤，生殖細胞瘤，乳腺癌，小細胞肺癌，主要應用于常規治療失敗或復發難治以及具有不良預后因素的患者。造血干細胞以不對稱有絲分裂方式進行增殖，一個干細胞分裂產生兩個子細胞，一個分化為造血祖細胞，另一個則保持干細胞特征。造血干細胞在不斷體外培養產生大量造血祖細胞同時，保持自己既不增殖也不分化。體外培養微環境合適，造血干細胞可持續維持培養 60 天左右。 造血干細胞體外增殖培養需要基質細胞滋養（滋養層細胞），缺少滋養層細胞不增殖，無法長期培養，本產品為收集培養好的造血干懸浮細胞灌裝發貨，不包含滋養層，因此收貨后建議盡快實驗。

原代細胞的培養條件：

　　一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養)培養

　　1、細胞要通過充分漂洗，以盡量除去消化液的毒性；

　　2、細胞接種時濃度要稍大一些，至少為5×108細胞/L；

　　3、培養基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養；

　　4、 胎牛血清濃度為10%-80%

　　5、應在37℃5% CO2的培養箱中培養；

　　6、在起始的2天中盡量減少振蕩，以防止剛貼壁的細胞發生脫落，漂浮；

　　7、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網狀，應將原代細胞換液；

　　8、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經靜置培養1周時，應將細胞懸液經低速離心后換液。

　　二、懸浮細胞培養

　　1、原代培養時要盡量去除紅細胞；

　　2、短期培養，可在含10%小牛血清的RPMI1640培養基中進行；

　　3、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內，進行分瓶試驗；

　　4、長期培養時，淋巴細胞中要加入生長因子，白血病細胞中要加入少量的原患者血清，以利細胞生長；

　　5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次；

　　6、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時才能進行。

方法簡介：

實驗室分離的人臍帶血造血干采用采集臍帶血、密度梯度離心、差速貼壁法結合培養基篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測：

實驗室分離的人臍帶血造血經CD34免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養信息：

培養基：含FBS、SCF、IL-3、TPO、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：懸浮

細胞形態：圓形

傳代特性：不建議傳代

培養條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

人臍帶血造血干體外培養周期有限；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養，以此保證該細胞的佳培養狀態。

細胞傳代及凍存：

原代細胞的培養方法一般有以下4種：

　　① 組織塊培養法

　　組織塊培養是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養瓶(或皿)中，瓶壁可預先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。

　　② 消化培養法

　　③ 懸浮細胞培養法

　　對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養，或經淋巴細胞分層液分離后接種培養。

　　④器官培養

　　器官培養是指從供體取得器官或組織塊后，不進行組織分離而直接在體外的特定環境條件下培養，器官培養可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細胞間的聯系、排列情況和相互影響，以及局部環境的生物調節作用。

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